病毒的核酸检测是怎么检测的？
操作方式
- 01
什么是核酸？
核酸是地球上所有已知的生命体必不成少的一种构成物质。它本家儿要分为两种：脱氧核糖核酸、核糖核酸。
脱氧核糖核酸，其实就是我们常说的DNA，地球上几乎所有生物的遗传物质。而很多冠状病毒的遗传物质，则是RNA，也就是核糖核酸。
所以病毒核酸检测，其实就是对病毒的遗传物质RNA进行检测。
而针对病毒RNA进行检测的手艺，还可以分两种：一种是及时荧光RT-PCR，一种是病原宏基因组测序（mNGS）
- End
及时荧光RT-PCR
- 01
起首要采集样本。因为新冠病毒是经由过程呼吸道传染人体，所以样本要从呼吸道采集。今朝常规的样本类型大致有2类：一类是用咽拭子、鼻拭子在人的上呼吸道（咽部或鼻腔）擦拭采集；另一类是收集下呼吸道痰液、支气管灌洗液、肺泡灌洗液等。采集到的样本将被严酷封存，送到尝试室。那边是检测员让病毒“现形”的疆场。
- 02
提取病毒的RNA
先从样本中提掏出病毒的RNA。具体来说，就是在样本中插手核酸提取试剂，把病毒粉碎，让核酸释放出来。
*提取病毒核算必需在高级此外生物平安柜内完当作。图为水母尝试室蜜斯姐利用生物平安柜进行的操作演示。
- 03
把病毒RNA“反转录”当作cDNA
经由过程反转录手艺（RT），把病毒的RNA“反转”当作一种特异DNA，即cDNA（因为病毒RNA布局不不变，所以把病毒RNA转换当作不变的cDNA会更便利检测）
这里会用到核酸检测试剂盒中一种叫“反转录酶”的物质。而完当作转录后，所有工作都将环绕cDNA睁开。 - 04
进行cDNA的扩增与检测
简单说就是扩增cDNA的数目。这里应用的就是PCR，全称聚合酶链式反映。具体来说，就是借助试剂盒中一些特别物质，让cDNA不竭复制，使其数目呈指数式增加。
所谓RT-PCR，就是将RNA的反转录（RT）和cDNA的扩增（PCR）相连系的手艺。
当cDNA扩增的同时，试剂盒中还有一种叫荧光探针的工具同时工作。它会释放荧光旌旗灯号，cDNA每完当作一次扩增，荧光旌旗灯号就会增添一点，而PCR检测仪就能记实到一个荧光旌旗灯号增添的Ct值。
*图中左边白色的仪器叫QPCR仪。上面说到的转录、扩增、检测都是在这台QPCR仪上完当作。电脑上显示的红线，我们也可以理解为Ct值的曲线。
- 05
出成果
这一步就是按照检测仪记实的Ct值，进行检测成果阐发。
抱负状况下，若是样本中有新冠病毒，那么在cDNA完当作预订次数的扩增后，检测仪记实的Ct值就会形当作一个逐渐上升的S形曲线，检测成果为阳性；若是没有近似的S型曲线，检测成果就为阴性。
做完以上所有工作，凡是需要4~6小时。
- End
基因测序手艺
- 01
病原宏基因组测序（mNGS），是针对病原微生物（细菌、真菌、病毒和寄生虫等）利用的基因测序手艺。它的道理就比力简单了。
起首，我们要把握病毒的基因序列。
然后是检测。在尝试室里，手艺人员操纵基因测序仪器，针对样本中提取的病毒RNA或总核酸进行检测。当样本中检测出的病毒基因序列，与已知的新冠病毒基因序列高度同源，就可以确诊传染。 - 02
基因测序是一个加倍复杂且耗时的过程，可以简单归纳为以下7个步调：
① 采集样本：与前面介绍一致
② 从样本中提掏出病毒RNA：与前面介绍一致
③ 把病毒RNA反转录为cDNA：为了便于检测，测序也需要进行反转录。
④ 文库构建：翻译过来，就是把完整的DNA链条打坏当作片段，接着给DNA片段结尾修复，然后给DNA片段加上独有的样本编码（用于识别这个样本是谁的），并把DNA片段用一个接头固定起来，便利测序……
⑤ 高通量测序：经由过程高通量测序仪，把文库的核酸序列检测出来。
⑥ 生物信息阐发：把测出的DNA序列与已有的数据库进行比对。
⑦ 出具检测陈述 - 03
这样一套完整的病毒基因测序流程，加上出成果，凡是需要24~72小时。
- End
- 发表于 2020-05-22 12:02
- 阅读 ( 576 )
- 分类：医疗卫生
